中藥飲片檢測色譜儀是一種基于色譜技術(shù)的分析儀器,它能夠?qū)χ兴庯嬈械某煞诌M(jìn)行高效、精準(zhǔn)的定性和定量分析。其主要利用不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異,通過色譜柱進(jìn)行分離。在分離過程中,樣品被注入色譜柱,流動(dòng)相攜帶樣品通過色譜柱,不同成分在色譜柱上的保留時(shí)間不同,從而實(shí)現(xiàn)分離。分離后的成分被檢測器檢測,并轉(zhuǎn)化為電信號進(jìn)行記錄和分析。
中藥飲片檢測色譜儀的操作步驟如下:
1、樣品準(zhǔn)備:
粉碎與混合:將中藥飲片粉碎成均勻粉末,確保樣品具有代表性。
提取有效成分:使用適量溶劑(如甲醇、乙醇)對樣品進(jìn)行超聲處理,使有效成分充分溶解。
離心沉淀:通過離心處理去除固體顆粒,取上清液作為供試品溶液。
過濾處理:供試品溶液需經(jīng)孔徑為0.45μm的濾膜過濾,必要時(shí)進(jìn)行預(yù)凈化,防止污染色譜系統(tǒng)。
2、儀器準(zhǔn)備:
流動(dòng)相配制:使用色譜純試劑配制流動(dòng)相,根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整比例(如甲醇-水混合液)。流動(dòng)相需經(jīng)0.45μm濾膜過濾并脫氣處理。
色譜柱安裝:選擇適合目標(biāo)化合物分離的色譜柱(如C18柱),確保安裝方向正確,避免劃傷或扭曲。
系統(tǒng)平衡:啟動(dòng)色譜儀,用流動(dòng)相沖洗色譜柱至壓力穩(wěn)定(約30分鐘),確保基線平穩(wěn)。
3、參數(shù)設(shè)置:
流速與溫度:根據(jù)色譜柱要求設(shè)置流速(如1mL/min)和柱溫(如30-40℃)。
檢測波長:根據(jù)目標(biāo)化合物特性設(shè)定檢測波長(如丹皮酚檢測波長為274nm)。
進(jìn)樣量:根據(jù)儀器類型選擇進(jìn)樣量(如手動(dòng)進(jìn)樣10-20μL,自動(dòng)進(jìn)樣按程序設(shè)定)。
4、進(jìn)樣操作:
手動(dòng)進(jìn)樣:使用微量注射器抽取供試品溶液,注入六通閥進(jìn)樣器,快速切換至進(jìn)樣位置。
自動(dòng)進(jìn)樣:將供試品溶液裝入進(jìn)樣瓶,放入自動(dòng)進(jìn)樣器貯樣室,按程序設(shè)定進(jìn)樣參數(shù)(如起始位置、進(jìn)樣體積)。
5、數(shù)據(jù)采集與分析:
啟動(dòng)數(shù)據(jù)采集:進(jìn)樣后立即啟動(dòng)色譜工作站,記錄色譜圖,包括峰面積、保留時(shí)間等參數(shù)。
基線校正:在數(shù)據(jù)采集過程中進(jìn)行基線校正,確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
含量計(jì)算:利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或內(nèi)標(biāo)法計(jì)算目標(biāo)物質(zhì)含量,重復(fù)進(jìn)樣至少2次,取平均值。
6、結(jié)果驗(yàn)證與報(bào)告:
系統(tǒng)適用性試驗(yàn):檢查理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性等指標(biāo)是否符合要求(如理論板數(shù)≥5000)。
結(jié)果驗(yàn)證:通過質(zhì)控樣品或加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果準(zhǔn)確性。
打印報(bào)告:使用色譜工作站生成檢測報(bào)告,包括色譜圖、峰面積、含量結(jié)果等信息。
7、儀器關(guān)機(jī)與清洗:
關(guān)閉檢測器:按程序關(guān)閉檢測器(如火焰離子化檢測器需先熄火)。
色譜柱清洗:用高比例有機(jī)相(如甲醇)沖洗色譜柱,去除殘留雜質(zhì)。
關(guān)閉儀器:依次關(guān)閉泵、進(jìn)樣器、檢測器等模塊,斷開電源,清潔儀器表面。